果蠅的神經遞質係統與(yu) 哺乳動物係統非常相似，它們(men) 有許多類似的大腦結構，涉及類似的行為(wei) ，並且許多已知影響哺乳動物行為(wei) 的基因在果蠅中存在並執行相同的功能。強迫遊泳試驗（FST）已被廣泛用於(yu) 評估化合物的抗抑鬱功效，果蠅也嚐試采用這種試驗。蠅類強迫遊泳試驗有可能成為(wei) 評估潛在抗抑鬱藥物的一種經濟高效、高通量的檢測方法。


強迫遊泳測試（FST）是一種行為(wei) 絕望範式，經常用於(yu) 大鼠，以測量應對不可避免的逆境應對策略，其中被動應對策略（不動）被解釋為(wei) 抑鬱樣，而減少不動則作為(wei) 抗抑鬱藥樣的證據 效果。FST可用於(yu) 篩選給予其他健康大鼠藥物的抗抑鬱作用，用於(yu) 抑鬱症動物模型中的被動應對策略，或用於(yu) 研究抑鬱症的動物給予藥物的抗抑鬱樣作用。

在這項研究中，我們(men) 使用與(yu) 抗抑鬱症有關(guan) 的methamphetamine（METH）、DL-α-methyltyrosine（αMT）、citalopram（CIT）以及psilocybin（PSI）、5-HT1A受體(ti) 拮抗劑 WAY 100635（WAY）和5-HT2受體(ti) 拮抗劑 Ketanserin（KET），對果蠅運動活動以及FST的影響進行了藥理評估。

方法
果蠅活動監測係統用於(yu) 測量隨時間變化的運動活動。將雌雄蒼蠅分別放入透明的試管中，試管的一端塞有鬆散的棉花團，另一端裝有食物培養(yang) 基和塑料蓋。食物培養(yang) 基為(wei) vehicle、METH（5.0 mM）、αMT（3.0 mM）、CIT（0.3、1.0 或 2.5 mM）、PSI（0.03 mM、3.5 mM）、KET（1.0 mM）或 WAY（1.0 mM）。1×表示在分組條件下用處理食物喂養(yang) 蒼蠅24小時，之後轉移到vehicle培養(yang) 基的試管中，用vehicle培養(yang) 基中的PSI（0.03 mM）喂養(yang) 蒼蠅 1 天，然後用vehicle培養(yang) 基喂養(yang) 蒼蠅 4 天。5×表示蒼蠅在上述試管中連續喂食處理食物5天。將蒼蠅放入活動監測係統，每個(ge) 處理組的雌雄蠅各為(wei) n= 16，並在恒定光照條件下飼養(yang) 至少 5 天，同時進行監測。所有其他蒼蠅均在恒定光照條件下飼養(yang) 5 天，然後在 FST 中進行測試，每個(ge) 處理組中雌雄各n= 7 隻，FST 中的單個(ge) 數據點代表 16 隻蒼蠅的平均行為(wei) 。如圖 1所示。

圖1

果蠅強迫遊泳測試(FST)用於(yu) 測量兩(liang) 種實驗室6天齡雄性和雌性的不動行為(wei) 。將一天齡（5×）或兩(liang) 天齡（1×）的未被誘導的蒼蠅進行短暫麻醉，並分別放入塑料管中。然後將這些試管棉花狀放入200 mL移液器吸頭盒的支架中，並在恒定光照下放置至第5天。在4孔室載玻片上每孔放置一隻果蠅，對蒼蠅的FST行為(wei) 進行評估。使用頂置攝像頭記錄蒼蠅在孔中最初5分鍾的FST行為(wei) ，以便隨後使用動物運動軌跡跟蹤係統分析SC不動的潛伏期、不動的時間和不動的次數。為(wei) 了驗證蒼蠅是否具有活動能力，在錄製5分鍾視頻後，用工具將每隻蒼蠅輕輕取出並放到紙巾上。任何不能立即離開的蒼蠅都被認為(wei) 是淹死的，隨後被排除在最終分析之外。由於(yu) CS果蠅的不同亞(ya) 品係已顯示出運動活動差異，因此在強迫遊泳測試中比較了兩(liang) 種 CS 亞(ya) 品係（CSX和CSCLWU）。


結果
強迫遊泳行為(wei) 和整體(ti) 運動活動因性別、劑量和給藥策略而異
在果蠅活動監測中分析發現，性別和治療之間存在顯著的相互作用，以及性別引起的顯著變化和治療。飼喂vehicle培養(yang) 基的CSX雌性和雄性比同性CSCLWU顯著更活躍（圖2A）。CSX和CSCLWU雄性的活躍程度顯著低於(yu) 同品係雌性。PSI (0.03 mM) 增加了 CSX 雌性果蠅的運動活動，但不增加CSX雄性或 CSCLWU 果蠅的運動活動。

在FST中，對自變量性別（雄性、雌性）和品係（CSX、CSCLWU）進行雙向方差分析發現，性別和品係之間存在顯著的交互作用，以及性別引起的顯著變化和應變。雄性比雌性和CSX雄性更加不動，但雄性和雌性CSX果蠅之間沒有觀察到差異（圖2B）。CSX 雌性和雄性的不動次數明顯少於(yu) 同性 CSCLWU（圖 2B）。

由於(yu) 給予 0.03 PSI (1×) 的CSCLWU果蠅在FST中更加不動，並且沒有增加它們(men) 在果蠅活動監測係統中的整體(ti) 運動活性，因此選擇該品係進行額外的實驗。此外，由於(yu) 雄性CSCLWU果蠅明顯比雌性果蠅更不動，因此在隨後的FST分析中對性別進行了獨立評估。

圖2

強迫遊泳中的靜止狀態與(yu) 整體(ti) 運動活動無關(guan) ，CIT可以減少這種不動性
將FST行為(wei) 與(yu) 第五天在用vehicle或vehicle介質中的藥物喂養(yang) 的果蠅活動監測係統中的整體(ti) 運動活動進行比較（圖 1）。使用的藥物為(wei) METH (5.0 mM)、αMT (3.0 mM) 和 CIT (0.3 mM、1.0 mM、2.5 mM)。

對自變量性別（雄性、雌性）和藥物治療（vehicle、METH）的雙向方差分析發現，性別和治療之間存在顯著的交互作用，以及由性別和治療引起的顯著變異。飼喂vehicle的雄性活性顯著低於(yu) 飼喂vehicle的雌性。METH顯著增加了雄性和雌性的運動活動（圖 3A）。

自變量性別（雄性、雌性）和藥物治療（vehicle，αMT）的雙向方差分析發現性別和治療之間存在顯著的相互作用，以及性別和治療之間的顯著變化。飼喂vehicle的雄性的活性顯著低於(yu) 飼喂vehicle的雌性。αMT顯著降低雄性和雌性的運動活動（圖 3B）。

對自變量性別（雄性、雌性）和藥物治療（vehicle、0.3、1.0和2.5 mM CIT）的雙向方差分析發現性別和治療之間存在顯著的相互作用，以及兩(liang) 種性別引入的顯著變異和治療。飼喂vehicle的雄性活性顯著低於(yu) 飼喂vehicle的雌性。2.5 mM CIT 顯著降低雌性的運動活動，但各組之間沒有觀察到其他差異。（圖 3C）。

由於(yu) 雄性在果蠅活動監測係統時活躍程度始終顯著較低（圖 2a、3a-c），因此使用單向方差分析獨立評估性別的FST行為(wei) 。CIT顯著降低了雄性的不動性，增加了雌性和雄性的SC不動潛伏期，並減少了雄性的不動次數。與(yu) vehicle相比，METH或αMT的任何結果測量均未觀察到顯著差異（圖 4）。

圖3

圖4

對PSI的總體(ti) 運動反應因性別、劑量和用藥策略而異
為(wei) 了評估PSI對果蠅活動監測係統中整體(ti) 運動活動的影響，給予PSI (0.03 mM、3.5 mM) (1x)。自變量性別（雄性、雌性）和藥物治療（vehicle，PSI 3.5 mM，PSI 0.03 mM）的雙向方差分析發現性別和治療之間存在顯著的相互作用（圖5A），並且因性別和治療造成顯著差異。對照雄性的活躍程度顯著低於(yu) 雌性。PSI在3.5 mM時降低雌性的運動活性，但在3.5 mM和0.003 mM時增加雄性的運動活性。

慢性和低劑量PSI對整體(ti) 運動活動的影響不同
為(wei) 了評估PSI在果蠅運動監測中的結果是否是由於(yu) 5-HT1A或5-HT2A血清素受體(ti) 的作用所致，在PSI（0.03mM）、WAY（1.0mM）、KET（1.0mm）及vehicle上飼養(yang) 蒼蠅5天（5×）。分析發現性別和藥物治療之間存在顯著的相互作用，以及由於(yu) 性別和藥物治療而產(chan) 生的顯著變化（圖5B）。對照組雄性的活躍程度顯著低於(yu) 雌性。KET顯著降低雌性和雄性的運動活動。WAY 顯著降低了雄性的運動活動，但對雌性沒有影響。接受PSI的雌性和雄性明顯比接受 KET的同性更活躍。（圖 5B）。

圖5

PSI對強迫遊泳中不動的影響與(yu) CIT相當
CIT 5× 能顯著降低雄性的不動性、SC不動性潛伏期和陣發性不動性，並能顯著降低雌性的SC不動性潛伏期和陣發性不動性。在 3.5 mM和 0.03 mM下，PSI能明顯降低雄性的不動性；在 3.5 mM和 0.03 mM下，PSI能明顯降低雄性第一次不動的潛伏期；在 3.5 mM和 0.03 mM濃度下，PSI能明顯降低雄性不動的陣發性。（圖6）。

圖6

討論
METH（圖3A）和αMT（圖3A）顯著改變雄性和雌性果蠅的運動活動，但很大程度上不影響FST行為(wei) （圖4）。相比之下，CIT (1.0 mM) 5× 不影響雄性或雌性果蠅的運動活動（圖 3C），但顯著降低雄性不動性、兩(liang) 性的不動潛伏期和雄性不動性發作次數（圖 4）。因此，FST的運動活動與(yu) 整體(ti) 運動活動脫鉤，並受到 SSRI 抗抑鬱藥物的選擇性調節（圖 4）。

高劑量和低劑量的PSI 1× 均顯著降低了FST中雄性的不動行為(wei) （圖 6），但也增加了果蠅活動監測中的整體(ti) 運動活動。在FST的典型使用中，抗抑鬱藥物選擇性地增加FST的活性，但不會(hui) 增加整體(ti) 運動活性。然而，在FST的典型使用中，所研究的藥物是在測試後24小時內(nei) 服用的。在此實驗中，僅(jin) 施用PSI一天，然後在測試前對果蠅施用vehicle 4天。與(yu) 雌性和另一品係的雄性相比，CSCLWU雄性果蠅似乎特別不愛動（圖2），因此 DAMS 和 FST 中運動活動的增加可能表明功能的增強和隨後行為(wei) 的正常化。支持這一假設的是，PSI（0.03 mM）5×以及 WAY 和 KET 5×降低了雄性 DAMS 的活動（圖5B）。 WAY 對 5-HT1A 受體(ti) 的慢性拮抗作用和KET對 5-HT2 受體(ti) 的慢性拮抗作用導致了與(yu) 慢性PSI相似的行為(wei) 結果。因此，觀察到的果蠅活動監測中活性降低可能是受體(ti) 內(nei) 化的結果。

參考文獻
Hibicke M, Nichols C D. Validation of the forced swim test in Drosophila, and its use to demonstrate psilocybin has long-lasting antidepressant-like effects in flies[J]. Scientific Reports, 2022, 12(1): 10019.

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