斑馬魚行為(wei) 軌跡跟蹤係統(DanioVision)是一種多功能研究工具，可使用適合該設備的孔板來研究斑馬魚。斑馬魚研究中使用的標準孔板有 24、48 或 96 孔。
孔板尺寸是否重要？
Wolter和Svoboda在一篇《神經科學方法》（Neuroscience Methods）論文中描述了他們(men) 如何使用斑馬魚行為(wei) 軌跡跟蹤係統來研究使用孔板的大小尺寸是否會(hui) 影響基於(yu) 運動的晝夜節律[1]。原因顯而易見：孔板中的孔數越多，意味著（可移動的）空間越小。增加研究的孔數可以提高研究的產(chan) 量，但可能會(hui) 降低研究結果的穩定性。
使用斑馬魚行為(wei) 軌跡跟蹤係統進行研究
斑馬魚行為(wei) 軌跡跟蹤係統（DanioVision）是一款用於(yu) 斑馬魚和其它小型生物的高通量跟蹤係統，可應用於(yu) 許多領域的研究，例如癲癇行為(wei) 研究、晝夜節律、運動控製、運動障礙、神經發育等。無論使用的是6、12、24、48還是96孔板，該觀察箱都可以容納孔板，並對其中的斑馬魚幼魚進行高通量觀察分析。也可以支持使用培養(yang) 皿或其他小容器。
孔板尺寸的變化會(hui) 導致行為(wei) 差異嗎？
斑馬魚幼魚在環境變化（如光暗轉換）的觸發下會(hui) 增加運動，Emran 等人於(yu) 2008年對這一特定現象進行了研究[2]。基於(yu) 此，Wolter 和 Svoboda在他們(men) 的論文中指出，許多研究小組都在研究斑馬魚的行為(wei) ，以觀察神經係統的發育和功能，但所使用的孔板卻存在很大差異：有些小組在 96 孔板中進行這些行為(wei) 測定，而有些小組則在 24 孔板中進行這些測定。這種尺寸差異對斑馬魚發育階段的（晝夜節律）行為(wei) 有何影響？
孔板中的長期實驗麵臨(lin) 風險
使用斑馬魚行為(wei) 軌跡跟蹤係統對斑馬魚在 5-23 dpf 期間的晝夜節律（通過運動）進行了跟蹤和分析。圖 1顯示了同時跟蹤24隻幼魚的示例，並顯示了幼魚最初五分鍾的活動軌跡。
圖1
他們(men) 在 12 孔板（直徑20毫米）、24 孔板（直徑15毫米）、48 孔板（直徑 10 毫米）和 96 孔板（直徑 6.54 毫米）中記錄了 5-6 dpf 幼魚27小時的運動活動（圖 2）。無論孔板大小如何，幼魚的晝夜節律看起來都相對典型。
圖2
然而，在單獨分析時，典型晝夜節律(typical CR)的百分比隨著每板孔數的增加而下降。在48孔板和96孔板中跟蹤幼魚與(yu) 在12孔板和24孔板中跟蹤幼魚相比，個(ge) 體(ti) 典型晝夜節律出現的一致性較差。進一步分析比較了不同孔板的典型晝夜節律百分比，12孔板和24孔板的典型晝夜節律出現率沒有差異，但24孔板和48孔板以及24孔板和96孔板的典型晝夜節律出現率存在顯著差異。
在含有24個(ge) 或更多孔的板中飼養(yang) 幼魚時，除了晝夜節律變異性增加外，幼魚活動的幅度也急劇下降50%以上。在孔數較多的孔板中看到的個(ge) 體(ti) 變異性增加可能是由於(yu) 孔徑減小，活動空間就更小了。由於(yu) 在12孔板或24孔板中跟蹤的幼魚的典型晝夜節律出現率沒有差異，他們(men) 決(jue) 定在24孔板中進行後續實驗。在這些孔板中，幼魚表現出更高的運動活性。
本文發現，當監測5-23 dpf幼魚的運動活動作為(wei) 晝夜節律的讀數時，在96孔板中跟蹤幼魚的高通量方法可能會(hui) 麵臨(lin) 挑戰。對於(yu) 短期實驗而言，使用96孔板所發現的這些限製還有待證實。
總結
最終，Wolter 和 Svoboda 提出了明確的建議：由於(yu) 晝夜節律（通過運動行為(wei) 衡量）的變異性，長期斑馬魚行為(wei) 學實驗不推薦在48孔板或96孔板中進行，使用24孔板使這些研究從(cong) 高通量轉變為(wei) 中等通量將會(hui) 是更好的選擇。
參考文獻
1.Wolter, Matthew E.; Svoboda, Kurt R. (2020). Doing the locomotion: Insights and potential pitfalls associated with using locomotor activity as a readout of the circadian rhythm in larval zebrafish. J. Neurosci. Methods, 330, 108465
2.Emran, Farida; Rihel, Jason; Dowling, John E. (2008). A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities. J. Vis. Exp.(20), 923
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